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点击次数:175 发布时间:2020-05-25

清晨,美好的开shi,我司zhunin今天jing神棒棒,huo力多多,心情好好,一切du好!

那么,ninzhi道ELISAshi剂盒许多重要的环节duhui影响到ELISAshi剂盒检测的质量吗?下面我gong司jishu人员与大jia唠唠ELISAbi威体育下载管理的相guan信息: 

一、方法学的影响

ELISA测定模式包括以下几种:双抗体jia心法、间jie法、双抗原jia心法、IgM抗体捕捉法、竞争yizhi法,其中竞争yizhi法yin受cao作时差所引qi的不gongping竞争等yin素的影响,结果重复性较差,质量较难kongzhi。

二、shi剂yin素

1.shi剂的xuan择

免疫检测的原理jun基于抗原抗体fan应。由于该fan应过程受多种yin素的影响,如普遍cun在基质效应、交叉fan应等,yin而检测结果难以su源,不tong方法、不tongshi剂zhi间甚至tong一shi剂不tong批号间结果junquefake比性。shi剂质量在很大程度上jue定了检测的水ping,yin此在引入新xiang目zhi前bi须duishi剂jin行严格的评估。

shi剂的评估有以下几个步骤:

⑴确定开展该xiang目的bi要性;

ing私飧脁iang目现有的检测方法和原理;

⑶在了解shi剂的组成基础上xuan择多jiashi剂盒jin行比较,pan断标准应xuan参kao方法或参kao物质,其次为临床的满意度及机构的报告如ge级室间质量评价、CDC报告等;

⑷定期dui检测结果jin行追zongfan馈直至终认ke该shi剂。

2.shi剂的准备

不tong批次的ELISAshi剂在zhi作过程中很难保zheng质量完全一致,ji使是通过批批检的xiang目其检测结果也cun在差异,yin此bi须xuan择和订购长批号的shi剂,并保zheng保cun条件。严格执行这一标准ke以避免yinshi剂批号改bian而重新建立质kong体系及重新评估shi剂的复杂过程,并且能够保zheng结果的稳定性uan杂谛诙獭⑹褂寐实偷膕hi剂,应当小量分zhuang,每次使用则取分zhuang部分jike,避免fan复冻融造成shi剂的失效。

shi剂使用前bi须苆iao庵潦襴en,否则hui影响检测下限。wei用完的室内质kong品糰n敬尾粁u使用的shi剂应密feng并及时放回bingxiang保cun。

三、样本yin素

标本干扰yin素包括内源性干扰yin素和外源性干扰yin素,前者包括类风湿yinzi、补体、异嗜性抗体、zi身抗体、溶jun酶等,后者包括标本溶xue、标本bei细junwu染、标本zhucun时间过长、标本凝固不全、ling冻标本的fan复冻融等。其中外源性干扰yin素是我们在检测过程中ke以避免也是bi须避免的yin素,而避免内源性yin素的干扰则主要通过xuan择合适的shi剂盒。在临碿ang杏龅缴偌囊赡巡±庇Φ眐ao虑到内源性干扰yin素的cun在。

以下dui外源性干扰yin素jin行简要说明:

(1)标本溶xue 要注意避免出现严重溶xue。xue红蛋bai中han有xue红素基团,其具有类过氧化物的huo性,yin此,在以la根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)为标记酶的ELISA测定謝iao绻鹸ue清标本中xue红蛋bai浓度较gao,则其jiu很容襷i趙en育过程中xi竕ie诠滔啵佣牒竺婕尤氲牡孜飂an应显色。

(2)标本bei细junwu染 标本的采集及xue清分离要注意尽量避免细junwu染。细junjun体中除ke能han有内源酶dui测定产shengfei特异性干扰外,还ke能dui抗原抗体等蛋bai产sheng分解作用。ling外标本在保cun中出现hun浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。

(3)标本zhucun时间过长 标本在低wen下保cun时间过长,IgGke聚合成多聚体,在间jie法ELISA测定中hui导致本底加深、甚至出现假阳性结果。通常情况下xue清标本ke在2~8℃下保cunl周,ling冻保cun时间hui更长,但dui于抗体或抗原han量低的标本而言,则ke能huiyin抗体掉价、抗原分解而出现假yin性结果。

(4)ELISAshi剂盒标本凝固不全 xue液通常在采集后半小时后开shi凝固,18~24h完全凝固。如果在xue液wei凝固时ji离心分离xue清,则keyinbi威体育下载蛋皕i璮ei特异xi竕ie谖⒖锥斐杉傺粜越峁N怂醵瘫瓯敬硎奔洌琸e以在离心前将xue液标本置于wenxiang中wen育或者采用带分离jiao的采xue管或于采xue管中加入适当的促凝剂以加速xue清的分离。

(5)ling冻保cun标本避免fan复冻融 标本的fan复冻融huiyin其所产sheng的机械剪切力dui标本中的蛋bai等分zi产sheng破huai作用,使抗体效价die落从而引qi假yin性结果,ELISAshi剂盒所以测抗体的xue清标本如xu保cun作多次检测,宜少量分zhuang冻cun。此外,标本在冻cun蔮ei醳in蛋bai质局部浓缩,分布不jun,yin此重新融解的标本bi须hun匀,但不要jin行剧烈振dang,fan复dian倒jike。 

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